肉的宰后嫩化首要归因于肌原纤维材料材料材料设备构造的损伤，肌原纤维材料材料材料设备构造是由内源性血清淀粉水解表现酶溶解肌原纤维材料材料材料和細胞骨架血清导致的的。与一百多年来一支是关注公众号亮点的钙血清酶各种不同，胱天血清酶（caspases）在最近这一段时间成感想象力话语题。胱天血清酶在細胞凋亡的程序执行第一阶段起着关键性的用处，中仅caspase-3在死了血清淀粉水解表现中的用处是供需双各方面和较为复杂的，因为需要进两步分析。S-亚硝基化根据调高钙降低、激光能量基础代谢、血清质溶解和細胞凋亡来调高色泽，具有嫩度和持水的能力。的早期分析找到S-亚硝基化就能够再降忽略线粒体的caspase-3级联表现，这可能是脂肪細胞凋亡和牛羊肉品控变现的其原因。caspase-3的分析关键是其与細胞凋亡的原因，可是，不怎么有分析研究S-亚硝基化调高caspase-3的机制化。

2024年9月由成都渔业院校张万刚博士生导师项目团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱海洋生物为该研究提供了亚硝基化淡化组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文版版头：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

学术期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202历经四年损害分子：5.7

发布耗时：2024年9月

潜在客户计量单位：南京农业大学

调查装修材料：蛋白

拜谱出具枝术：亚硝基化修饰组学

系统路线地图：

一、钻研最终

01.Caspase-3几丁质酶

近几年尚不清理NO对caspase-3的可抑制成用是否能够归因于NO介导的S-亚硝基化，不一样溶液浓度均值的GSNO作外源性NO现货供应，以诱导性caspase-3的休外S-亚硝基化。报告单表述，与不会GSNO的组相较，100、200和400μM GSNO组的caspase-3几丁质酶特殊降（图1），与原先媒体报道共同。GSNO外理降caspase-3几丁质酶的未知原故仍迫切需要指出。

图1 有所不同氨水浓度的GSNO正确处理对caspase-3抗逆性的反应

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化度

探讨Caspase-3的亚硝基化限度，以系统阐述GSNO对Caspase-3的响应性。经GSNO解决后，判断到caspase-3淀粉酶S-亚硝基化效果不断增加（图2）。这类虽然表述，外源性GSNO锻炼可成功创业帮助caspase-3的休外S-亚硝基化。惹人惊呆的是，在未GSNO存有的對照组中判断到同一个薄弱的S-亚硝基化带，这表述caspase-3可能性发现内源性的S-亚硝基化。于此，本探讨中caspase-3的S-亚硝基化限度较高，而caspase-3的抗逆性消减，这与之间的探讨不符。虽然，caspase-3的炎症因子聊天S-亚硝基化体现位点尚不非常清楚，还须要进一大步的生命的进化。

图2 GSNO整理对caspase-3S-亚硝基化含量的后果

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化装饰组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。颜色标注的编码队列说明S-亚硝基化肽，桔红色标注的C说明S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3吸附结蛋清

结核蛋清身为的一种至关必要的内部骨架核蛋清，在稳定肌内部设计的设计全面性和收宿性层面起着至关必要的功效，深入分析S-亚硝基化caspase-3对结核蛋清溶解的太敏感度高的极具至关必要积极意义。与Std（未用胱天核蛋清酶-3和GSNO孵育的刚开始肌合成黏胶纤维核蛋清）组相较于，0 μM GSNO组（肌原合成黏胶纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的全面结核蛋清的含铁不错调低，信息提示caspase-3对结核蛋清极具内在的的核蛋清溶解总体水平。在GSNO孵育后，全面结核蛋清的的含铁明星加大（P < 0.05）。不仅而且，当GSNO溶液浓度身高时，全面结核蛋清的的含铁坚持上浮（P < 0.05）（图5）。这出现 证明，SNO淡化的caspase-3以总体水平依赖关系的方式方法促使结核蛋清的溶解。

图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3化学降解肌钙蛋清-T

肌钙核球蛋清-T (TnT)是原肌球核球蛋清也可以的调节担任肌肉组织缩小的细细的的必不可少肌原化学玻璃纤维材料核球蛋清。TnT的溶解共同点是在线论文检测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化状况下，caspase-3对TnT的溶解条件如下图一样6一样，与Std组（会含caspase-3和GSNO的肌原化学玻璃纤维材料）比起来，caspase-3组中30 kDa TnT场面看不出新增，反映caspase-3陆续参与了TnT的溶解，不仅，caspase-3与GSNO的孵育造成的30 kDa TnT回落。在100和200 μM GSNO组区间内未在线论文检测到看不出的之间的关系(P > 0.05)，而当GSNO的氧化还原电位达成400 μM 时，该场面看不出减掉(P < 0.05)。许多察觉到反映了SNO体现的caspase-3对TnT溶解的调控帮助。结核球蛋清和TnT是caspase-3的敏感脆弱底物，而GSNO补救减少caspase-3的几丁质酶将造成的肌原化学玻璃纤维材料核球蛋清溶解的程度减少。上面指出，NO诱导型的S-亚硝基化也可以确认体现半胱氨酸残基来也可以的调节caspase-3的几丁质酶，行而更加一个脚印影向其对结核球蛋清和TnT的核球蛋清淀粉水解本事，可以影向鸡肉品味。

图6. S-亚硝基化caspase- 3溶解肌钙蛋白质-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本钻研指在论述S-亚硝基化对caspase-3淡化的印象力举例后来对鸡肉片肌原人造食物纤维身体之外溶解的印象力。血清S-亚硝基化能能淡化caspase-3的半胱氨酸残基，最终得以以至于caspase-3生物消减，进这一步减缓了其对鸡肉片肌原人造食物纤维血清的血清蛋白质水解意识。

三、拜谱总结ppt

调查选取了酶活旋光度的测定，亚硝基化掩盖组学具体分析，WB等判断方式方法，发现血清S-亚硝基化就可以掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，这造成 了caspase-3亲水性的减低，齐头并进一步一个脚印克制了其对牛羊肉肌原人造纤维血清的血清蛋白酶质水解特性。本调查为释疑血清质亚硝基化对肉嫩的控制制度化出示了了个新的第三视角。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的淀粉酶质组学、绘制淀粉酶质组学、代谢转化组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸商品商品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺过酸、total氧化反应复原、矿酸巯基，欢迎大家咨询！

参考使用专著：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663